CO中毒血浆一氧化氮及其合成酶含量的动态观察

摘要 目的 检测一氧化氮(NO)及其合成酶(NOS)在急性一氧化碳中毒后急性期血浆中的变化，探讨其临床意义。方法 采用检测NO的中间代谢产物亚硝酸盐来反映NO及放射强度测定法测定NOS活性,分别测定一氧化碳中毒后急性期血浆NO和NOS变化，并行健康对照。结果26例急性一氧化碳中毒病人血清NO及NOS较对照组明显降低,中毒后第1 d开始降低，第3 d后开始慢慢恢复，至第10 d仍低于正常。结论 NO和NOS参与了一氧化碳中毒的病理生理过程，动态观察提示NO可能和一氧化碳中毒病情程度有关。
Continua observation of nitric oxide and nitric oxide synthase in plasma during acute carbon monoxide poisoning
ZHANG-Yonghe，SONG-Zujun. Department of Emergency, Xijing Hospital,Fourth Military Medical University, Xi’an, 710032, China
一氧化氮(NO)具有强大的松弛血管平滑肌作用，在缓激肽、乙酰胆碱介导下，NO渗入血管内 皮细胞基质并扩散至平滑肌细胞，与细胞膜受体作用，激活鸟苷酸环化酶(sGC)产生环鸟苷 酸(cGMP)，从而松弛血管平 滑肌，引起血管舒张。已经证实外周NANC神经递质即是NO， 一氧化氮(NO)在机体中参与中枢神经系统多种生理和病理过程的调节,中枢神经细胞损伤过程的NO具有二重性,既可起脑保护作用,也有细胞毒性作用[1]。CO中毒致脑损伤的机制至今未明［2］。CO中毒致脑损伤的机制与NO的关系尚不清楚，本研究对26例急性一氧化碳中毒后急性期血浆中的一氧化氮及其合成酶进行连续测定,以探讨它们和一氧化碳中毒脑损伤病理过程的关系。
1 。材料和方法
1.1 临床资料 全部病例系1999-2000年我科住院的急性一氧化碳中毒病人，共26例，年龄13-76岁，其中男性15例，女性11例。入院时均有不同程度的意识障碍，其中深昏迷9例，中—浅昏迷17例，入院后24小时格拉斯哥（GCSS）分级：6—8分9例，9—12分12例，13—15分5例。平均住院日14日，其中3例患者发生迟发性脑梗塞，无患者死亡。
1.2 方法 入院后次日、3日、5日、7日、10日行肘静脉抽血液4ML。低温离心留血清检测。对照组均为健康自愿者，男性9例，女性5例。血清NO的测定按试剂盒说明书进行。原理是采用检测NO的中间代谢产物亚硝酸盐来反映NO。离心后取上清液再加入检测试剂,酶标仪测吸光度值,通过标准曲线回归方程计算亚硝酸盐的含量,换算出NO含量。采用放射强度测定法测定NOS活性。将血液高速低温离心后取上清液，经中性阳离子交换树脂吸附去除内源性精氨酸后，作为NOS制备物，然后以放射性同位素标记的精氨酸(3H-L-Arg)为底物，在多种辅助因子参与下，NOS的催化生成NO和质量标记的瓜氨酸(3H-L-Cit)产物。将反应混合物通过阳离子交换树脂选择性吸附未能转化的3H-L-Cit。收集流出液。在液体闪烁计数器上测量放射活性，得到3H-L-Cit的含量可计算出NOS的酶活性，以pmol 3H-Cit/mgPr*h为单位表示NOS的活性。
1.3统计学分析 数据以均数+标准差（x+s）表示，采用t检验，P<005为差异显著，P<001差异非常显著。
2． 结果
26例急性一氧化碳中毒病人血清NO及NOS较对照组明显降低（P<001），（表1）。中毒后第1 d开始降低，第3 d后开始慢慢恢复，至第10 d仍低于正常。（表2）。
表 1 急性一氧化碳中毒患者NO及NOS血清中浓度
例数 NO(μmol/L) NOS(pmol 3H- Cit/mgPr*h)
对照组 14 1.96±0.15 1.57±0.12
中毒组 26 1.50±0.10 1.19±0.07
注：中毒组与对照组比较：P<005
表 2 急性一氧化碳中毒患者NO及NOS血清中浓度变化测定
1 d 3 d 5 d 7 d 10 d
NO(μmol/L) 、1.05±0.12 1.16±0.13 1.69±0.15 1.79±0.16 1.88±0.16
NOS(pmol 3H- Cit/mgPr*h) 1.06±0.12 1.19±0.13 1.20±0.14 1.17±0.13 1.33±0.14
3． 讨论
NO是由一氧化氮合成酶（NOS）催化L-精氨酸所形成，被认为是一种新的自由基和神经递质[3]，在血管调节，神经传递，炎症，损伤，免疫等生理和病理过程中均发挥重要作用，生理量的NO可扩张血管，改善微循环及抗血小板凝集等，在病理情况下，NO释放减少可导致血管舒缩功能失调、血小板凝聚，是引起一系列疾病的病理基础。NOS是NO体内生物合成的主要限速酶，NOS具有三种类型，即神经元型NOS(nNOS)，内皮细胞型NOS(eNOS)，以及诱导型NOS(iNOS)。前两种类型属原生酶，但在病理状态下也可表达，生物活性依赖于Ca2+和钙调蛋白（CaM），而iNOS在免疫刺激和神经元损伤之后表达，在大多数情况下是Ca2+非依赖性的［5］。缺氧是引起急性缺氧性血管收缩的起始环节，但其发生机理尚不明了〔4〕。在病理情况下，NO释放减少可导致血管舒缩功能失调、血小板凝聚和内皮细胞增殖，是引起一系列疾病的病理基础。动物实验表明：急性缺氧和慢性缺氧时NoSmRNA表达水平下降，血管内皮细胞释放NO减少。冉杰鑫等〔2〕通过在常压缺氧条件下，对大鼠肺动脉、右心室一氧化氮合成酶mRNA表达的研究提示：缺氧可通过抑制血管内皮细胞NO的活性及mRNA表达，而在急性缺氧性血管收缩反应和慢性缺氧性血管收缩机制中起重要作用。CO中毒血浆NO的变化报告仍有争议，Harry等［7］和Stephen等［8］报告：CO中毒大鼠血浆NO增高。另有实验显示[9]：CO组大鼠在CO中毒血浆NO含量在第1、3、5、10天显著降低，且至第20天仍未恢复正常。本实验26例急性一氧化碳中毒病人血清NO及NOS较对照组明显降低，中毒后第1 d开始降低，第3 d后开始慢慢恢复，至第10 d仍低于正常。
本实验结果表明，急性一氧化碳中毒病人血清NO及NOS较对照组明显降低，对于进一步研究CO中毒引起的血小板活性变化和迟发性脑损伤的作用有一定意义。
参考文献
[1]. Lipton SA,Choi YB,Pan ZH, et al. A redox-based mechanism for the neuroprotective and neuroplest-ructive effects of nitric oxide and related nitrosocomponds. Nature,1993,364:626-632
[2] 何凤生．一氧化碳中毒研究动态．工业卫生与职业病，1984，10：259-263
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[6] 冉杰鑫，等.慢性缺氧对大鼠肺动脉和右心室内皮素与一氧化氮合成酶mRNA表达的影响.中华医学杂志，1995，8(8)：479-483
[7] Harry I,Michael FB,Tsuyoschi S，et al.Nitric oxide production and perivascular tyrosine nitratoin in brain after carbon monoxide poisoning in the rats.J Clin Invest,1996,97(10):2260-2267.
[8] Stephen R,Hom S,Tsuyoshi S,et al.Nitric oxide released by platelets inhibits neutrophil B2 integrin function following acute carbon monoxide poisoning.Toxicol Appl Pharmacol,1994,128:105-111
[9]高春锦，赵立明，夏成清，高压氧对CO中毒大鼠海马中钙离子、cGMP及血浆NO含量的影响 中华航海医学杂志 1999,4(6):